Use of sodC versus ctrA for real-time polymerase chain reaction-based detection of Neisseria meningitidis in sterile body fluids.

We evaluated the use of a newly described sodC-based real-time-polymerase chain reaction (RT-PCR) assay for detecting Neisseria meningitidis in normally sterile sites, such as cerebrospinal fluid and serum. The sodC-based RT-PCR assay has an advantage over ctrA for detecting nongroupable N. meningitidis isolates, which are commonly present in asymptomatic pharyngeal carriage. However, in our study, sodC-based RT-PCR was 7.5% less sensitive than ctrA. Given the public health impact of possible false-negative results due to the use of the sodC target gene alone, sodC-based RT-PCR for the diagnosis of meningococcal meningitis should be used with caution.

Avaliação de resultados discrepantes obtidos na execução de PCR em tempo real em amostras de pacientes com suspeita clínica de meningite bacteriana / Inconsistent results in real-time PCR in analyzing samples from patients with suspected bacterial meningitis

O princípio básico para obter resultado confiável é a compatibilidade entre as réplicas e suareprodutibilidade. Na rotina diagnóstica por PCR em tempo real (PCR-TR), em que centenas de amostrassão processadas, a obtenção de resultados com Cts tardios ou réplicas que diferem entre si por mais de trêsunidades, são inevitáveis. Das 3.000 amostras processadas em 2010, em duplicata, na rotina diagnósticadas meningites bacterianas por PCR-TR na pesquisa de N. meningitidis, S. pneumoniae e H. influenzae,157 (5,2 %), apresentaram inconsistência entre as réplicas (diferença entre Cts maior do que 3) e/ou altosvalores de Cts; e os ensaios foram retestados. O presente trabalho investigou estes resultados obtidos, osbenefícios destas repetições e as possíveis razões da ocorrência dos resultados discrepantes. Verificouseque, apenas 18 (11 %) das amostras submetidas à repetição, apresentaram resultados positivos. Erroshumanos inerentes à pipetagem, como o uso de pipetas não calibradas, a baixa concentração de DNAalvo nas amostras, a degradação da sonda ou mesmo a possível contaminação aleatória são fatores quecontribuem para induzir resultados discrepantes. A realização do ensaio de PCR-TR com amostras emduplicata e a repetição de ensaios com resultados discordantes é um artifício eficiente para avaliar e definirestes resultados.

Nova versão do ensaio da PCR em tempo real para o diagnóstico laboratorial e vigilância epidemiológica das meningites bacterianas / Impreved real time PCR assay for diagnostic and epidemiological surveillance of bacterial meningitis

A incorporação do ensaio “triplex” de PCR em tempo-real (PCR-TR) àvigilância das meningites bacterianas a partir de 2007 aumentou a detecção de S. pneumoniae em 52%, de N. meningitidis em 85% e de H. influenzae em 20%. Entretanto, a detecção do H. influenzae se limitou às cepas capsuladas de 4 sorotipos (“a”, “b”, “c”, “d”). Em 2011, um novo ensaio para detectar todos os sorotipos de H. influenzae, inclusive os H. influenzae não tipáveis, foi proposto,com a substituição do gene bexA pelo gene hpd no ensaio triplex (“triplexmodificado”) responsável pela proteína D de H. influenzae. Foram analisadas1619 amostras clínicas de líquido cefalorraquidiano e/ou sangue de pacientes com suspeita de meningite bacteriana do município de São Paulo no período de junho a dezembro de 2011, nos dois formatos de PCR-TR “triplex”. O novo ensaio “triplex modificado” (com o gene hpd) detectou 13 casos adicionais de H. influenzae, não registrados pelo outro formato (com o gene bexA). Destes 13 casos adicionais, 12 foram Hi-nt e um do sorotipo “f”. Não houve modificação na sensibilidade em detectar amostras positivas para N. meningitidis ou S. pneumoniae. O emprego deste novo formato “triplex modificado” irá aprimorar o diagnóstico e a vigilância epidemiológica das meningites bacterianas, contribuindo com a redução dos casos de meningite sem etiologia definida

Uso da técnica de PCR em tempo real no diagnóstico etiológico das meningites baterianas assocadas ao Staphyloccoccus aureus / Real-time PCR for etiological dianosis of bacterial meningitis associated in Staphylococus aureus

Dados do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN) mostram que, no município de São Paulo, em 2010 o gênero Staphylococcus esteve associado a 15 casos de meningite bacteriana confirmados por cultura. O objetivo deste trabalho foi analisar a frequência das meningites associadas à espécie Staphylococcus aureus no município de São Paulo no ano de 2010 por meio da técnica de PCR em tempo real (PCR-TR). Foram analisadas amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) e soro de 1.214 pacientes com suspeita de meningite bacteriana. Para a extração de DNA das amostras foi utilizado o kit comercial Nucleospin Blood® (Macherey-Nagel). A reação de PCR-TR utilizou o sistema TaqMan®, empregando-se o gene nuc, específico do S. aureus, como alvo. A espécie S. aureus esteve associada à meningite bacteriana em 16 (1,3%)dos 1.214 casos analisados. Todos estes casos tinham pelo menos um examecomplementar (bacterioscopia, cultura, contraimunoeletroforese e/ou teste deaglutinação pelo látex) realizado e PCR-TR em formato multiplex para Neisseriameningitidis, Streptococcus pneumoniae e Haemophilus influenzae negativo.Nenhum destes casos foi confirmado no SINAN como associado ao gêneroStaphylococcus. A técnica de PCR-TR pode representar ferramenta adicional àcultura para o diagnóstico etiológico das meningites associadas ao S. aureus,contribuindo para o aumento do número de casos de meningite bacteriana cometiologia determinada no município de São Paulo